大鼠低氧誘導(dǎo)因子1αelisa試劑盒的正確使用步驟分享

　　大鼠低氧誘導(dǎo)因子1αelisa試劑盒采用ELISA技術(shù)，通過(guò)雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)法，利用純化的抗體包被微孔板，與待測(cè)樣品中的HIF-1α特異性結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)洗滌、顯色和終止反應(yīng)等步驟，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度來(lái)計(jì)算樣品中HIF-1α的濃度。
 
　　為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，正確使用大鼠低氧誘導(dǎo)因子1αelisa試劑盒至關(guān)重要。以下是詳細(xì)的使用步驟：
 



 

　　一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
 
　　1、試劑盒檢查：確認(rèn)試劑盒包含標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)抗體、酶結(jié)合物、底物、終止液、洗滌液等，并檢查是否在有效期內(nèi)。
 
　　2、樣本準(zhǔn)備：采集大鼠組織或細(xì)胞樣本，按要求處理（如勻漿、離心）并保存于-80°C。
 
　　3、試劑平衡：將試劑盒從冰箱取出，室溫平衡30分鐘。
 
　　4、儀器準(zhǔn)備：確保酶標(biāo)儀、移液器、離心機(jī)等設(shè)備正常工作。
 
　　二、實(shí)驗(yàn)步驟
 
　　1、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)喊凑f(shuō)明書(shū)將標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋?zhuān)ǔＴO(shè)置6-8個(gè)濃度點(diǎn)。
 
　　2、加樣：將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加入酶標(biāo)板孔中，每孔100μL，設(shè)置空白對(duì)照。
 
　　3、孵育：37°C孵育1-2小時(shí)，使HIF-1α與包被抗體結(jié)合。
 
　　4、洗滌：棄去孔內(nèi)液體，加入洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)3-5次。
 
　　5、加檢測(cè)抗體：每孔加入100μL生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，37°C孵育1小時(shí)。
 
　　6、洗滌：重復(fù)洗滌步驟。
 
　　7、加酶結(jié)合物：每孔加入100μL酶結(jié)合物，37°C孵育30分鐘。
 
　　8、洗滌：再次洗滌。
 
　　9、加底物：每孔加入100μL底物溶液，避光孵育15-30分鐘。
 
　　10、終止反應(yīng)：每孔加入50μL終止液，顏色由藍(lán)變黃。
 
　　11、讀數(shù)：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。
 
　　三、數(shù)據(jù)分析
 
　　1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
　　2、計(jì)算樣本濃度：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中HIF-1α的濃度。
 
　　四、注意事項(xiàng)
 
　　1、操作規(guī)范：避免污染，使用一次性吸頭。
 
　　2、時(shí)間控制：嚴(yán)格控制孵育和洗滌時(shí)間。
 
　　3、儀器校準(zhǔn)：確保酶標(biāo)儀和移液器準(zhǔn)確。
 
　　4、重復(fù)實(shí)驗(yàn)：每個(gè)樣本至少做3次重復(fù)，確保結(jié)果可靠。